博彩资讯DQB1基因RT―PCR扩增及序列分析

  摘要:茫然的博彩资讯怒气总RNA,设计DQB1种质启蒙读本并举行逆再录音PCR技术。,缩小率幼苗的先后按次及生物软基序列辨析。坐果使知晓:,博彩资讯DQB1种质扣押为786 bp,编码261种氨基酸。博彩资讯DQB1种质与顾及分体中柱DQB1种质、柴纳分体中柱分体中柱MHCⅡ反日种质、山羊DQB1种质的核糖酸序列血亲性按次为。。、、,氨基酸序列血亲性按次。、、。
国文论文建立工作关系 /8/
关键词:博彩资讯;DQB1种质;RT-PCR;序列辨析
中图花色性格号:Q75; 公文独特的码:A 文字编号:0439-8114(2015)15-3784-02
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.15.053
Abstract: Total RNA from spleen of Tibetan sheep was extracted and reverse transcribed, and primers of DQB1 gene were designed for PCR 缩小。 Moreover, the gene sequence was analyzed by DNAStar software after the PCR products was 先后按次。 The results showed that the length of DQB1 gene was 786 bp, encoding 261 amino acids, and compared with DQB1 gene of Merino sheep, MHC Ⅱantigen gene of Merino 细打倒 sheep and DQB1 gene of goat, the nucleotide sequence homology of Tibetan sheep were , , respectively, and the amino acid sequence homology were , , 嫁妆。
Key words: Tibetan sheep; DQB1 gene; RT-PCR; sequence analysis
博彩资讯是柴纳三大原始绵羊性格经过,青海是次要产地。,分为高原模式、谷型与欧拉型。博彩资讯有稿秕饲料。、有益的种质特点,如抗病力强〔1〕。绵羊次要规划相容性复杂的(大) histocompatility complex,MHC是单独要紧的种质与了[2 ]的豁免应对。,它分为一类。、II类和III类分子,内侧的,MHC Ⅱ类分子的DRB和DQB种质编码幼苗在豁免系统中使受要紧的调控功能[3]。Saulman和及其他4项仔细考虑使知晓MHC花色性格 MAMU-DQB1种质慢速的狂热豁免缺陷病毒(SIV)I的攻击:严厉批评或猛烈攻击。绵羊和绵羊不健康中MHC-DQB1种质的遗传多型现象,如多浪羊种质单模标本DQB1-DF和DQB1-DH与斑点的抗性相互关系[5],MHC在抗病育种做成某事要紧功能〔6〕。像这样,本仔细考虑经过RT-PCR对博彩资讯DQB1种质举行缩小率并对DQB1种质举行序列辨析,针对为青海博彩资讯遗传资源剥削和抗病育种供给物顾及。
1 从科学实验中提取的价值与办法
从科学实验中提取的价值
.1 怒气 采自青海高原模式博彩资讯,液化氮速冻, -80 与发生性行为贮存物。
.2 次要反应性物 EASY spin Plus规划/细胞RNA敏捷茫然的反应性物盒为北京的旧称史蒂文森·艾德莱生物工艺学股份有限公司产额;Prime 本子逆再录音PCR技术酶、Ex Taq DNA凑合酶、 DL 2 000 DNA 胸甲是宝生物技术(大连)股份有限公司的产额。。
办法
.1 启蒙读本设计 因为NCBI的绵羊DQB1种质的序列辨析,设计博彩资讯DQB1种质启蒙读本,靶种质扣押为786。 bp。启蒙读本序列如次:DQB1-F:5′-ATGTCTGGGA
TGGTGGCTCTGC-3′,DQB1-R:5′-TCAGCGCACAA
GCCCCTTCT-3′。
.2 总RNA的茫然的 用液化氮将脾使成粉末成细粉,后续测度按反应性物盒阐明书按次举行。
.3 反再录音 土地素数 本子反再录音反应性物盒的按次下订单。。
.4 DQB1种质的缩小率 PCR反应性系统:PCR Buffer 5 μL,dNTPs 4 μL,DQB1-F 1 μL,DQB1-R 1 μL,cDNA 3 μL,Ex Taq DNA凑合酶 μL,杀菌水 μL。PCR缩小率先决条件的:94 ℃ 1 min,62 ℃ 1 min,72 ℃ 1 min,35个周而复始;72 ℃ 10 min,4 摄氏禁猎。
.5 DQB1种质的序列辨析 将批改的DQB1种质幼苗的PCR缩小率送至生物。,用DNASTAR软件对DQB1种质序列举行辨析。。
2 坐果与辨析
博彩资讯总RNA的茫然的坐果
博彩资讯怒气总RNA经1%洋菜植物琼脂糖凝胶电泳检测,坐果(图1)使知晓,茫然的的总RNA嫁妆潦倒。,但大致如此适合逆再录音PCR技术的声称。。
2.2 DQB1种质的RT-PCR缩小率
将RT-PCR缩小率幼苗举行1%洋菜植物琼脂糖凝胶电泳,坐果(图2)使知晓,游泳场涌现DQB1种质。,负把持无条纹。
2.3 DQB1种质的序列辨析
核糖酸序列辨析 计算的博彩资讯DQB1种质核糖酸序列经DNAStar软件辨析使知晓,DQB1种质的核糖酸序列扣押为786。 nt,GMP绝对较高。,范围,全种质序列中A T愿意的绝对较低(表1)。    博彩资讯与顾及羊DQB1种质核糖酸与氨基酸序列血亲比对辨析 将博彩资讯DQB1种质与顾及分体中柱DQB1种质(登录号:L0879)、柴纳分体中柱分体中柱MHCⅡ反日种质(登录号:)、山羊DQB1种质(登录号):核糖酸序列与氨基酸序列举行比拟。,坐果(图3)使知晓,博彩资讯DQB1种质与顾及分体中柱DQB1种质、柴纳分体中柱分体中柱MHCⅡ反日种质、山羊DQB1种质的核糖酸序列血亲性按次为。。、、;博彩资讯与顾及羊DQB1种质核糖酸血亲性比拟坐果(图4)显示,博彩资讯DQB1种质与分体中柱DQB1种质经过有3个碱基的拔出及33处核糖酸突跃,柴纳美利奴呢绒细毛羊MHC II种质中有32个碱基突跃。,山羊DQB1种质中在37个碱基突跃。,碱基突跃为、C-T经过的替换是次要的。,但也有低频率的A。、G-C经过的替换;氨基酸序列血亲性按次。、、(图5)。
3 议论
博彩资讯DQB1种质与分体中柱DQB1种质、柴纳美利奴呢绒细毛羊MHC Ⅱ反日G的核糖酸和氨基酸序列在背离。,阐明DQB1种质鉴于遗传变形可能会使遭受明显的性格绵羊在抗病力或在对不健康的敏感怎样上在背离。旁白,博彩资讯DQB1种质、分体中柱DQB1种质、柴纳美利奴呢绒细毛羊MHC Ⅱ反日种质核糖酸序列和氨基酸序列的背离,使知晓绵羊DQB1种质具有必然的守旧性。。
顾及公文:
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